【48812】Pure制备色谱运用——上样量篇（一）Flash和Prep液相色谱上样量挑选的理论基础

  Pure制备色谱运用——上样量篇（一）Flash和Prep液相色谱上样量挑选的理论基础

  Flash和Prep HPLC的上样量有很大不同。因为Flash色谱一般用于预纯化，高分辨率不是榜首先考虑的要素，因而上样量往往比Prep HPLC高。在Prep HPLC中，最大的意图是取得最高纯度的物质，故基线有必要得到别离。

  正相和反相二氧化硅（如C-18、氨基或二醇基）的上样量也存在相当大的差异。因为非键合相二氧化硅的表面积大，故这种固定相的载样才能更高。正相二氧化硅的载样才能一般比键合二氧化硅的载样量高约10倍。

  规范二氧化硅（粒径40-60 μm）一般可接受10%的载样量；在运用较小颗粒（15-30μm）时能够到达30%。但是，重要的一点咱们要知道，无论是反相仍是正相，上样量由样品的杂乱程度决议的。关于含有多种化合物的杂乱样品，决议其杂乱性的要素是纯化方针化合物与其附近的洗脱组分的别离程度。一般情况下，杂乱样品需求少数屡次的上样办法来处理。

  接下来“小步”同学将共享给咱们一篇关于Pure制备色谱上样量的运用文章，来让咱们感触下色谱的魅力。

  在液相色谱中，样品能够终究靠两种不同的办法上样：固体或液体。液体上样，是将样品溶解在溶剂中后，直接注入色谱柱上。固体上样，是将粗样品与载体资料（如硅胶）的固体均匀混合物放在色谱柱前面。

  液体上样是一种将样品很好地溶解在洗脱初始溶剂中的办法，可用于Flash和Prep液相色谱运用中。引荐运用弱极性溶剂，因为强极性溶剂会下降别离度。液体上样被认为是最简略、最方便的办法，但可能会形成样品丢失，需求细心考虑的要素如下：

  - 化合物在初始溶剂中的溶解度:样品需求彻底溶解，因为进样体系或色谱柱顶部的沉积可能在体系中产生过大的压力，并最终导致样品丢失。

  - 样品量：每根色谱柱都有规则的装载量。抱负的样品量不该超越纯化柱的最大装载量。

  在Flash液相色谱中，一般是在注射器的协助下将液体样品手动直接注入到色谱柱顶部（如下图）。因为高背压，无法在Prep液相色谱柱上进行手动上样。因而，它是经过专用的进样阀完结的，如图所示：

  - 最终，将粗样品和硅胶的混合物装入固体装样器中，然后将其安装在色谱柱的前面。衔接溶剂洗脱流路。

  支撑资料在固体上样技能中起到至关重要的效果：吸收粗样品，使洗脱的化合物能更好地搬运和分配。它还能够将样品固定在恰当的方位。这关于具有挑战性的样品（如油性提取物）十分有利。非键合的二氧化硅是最常用的吸附剂，但可能不是最佳的挑选。一般，主张运用与色谱柱相同类型的硅胶作为支撑资料。这样做才能够防止不必要的化学相互效果或样品的不可逆吸附。一种有用的代替资料是 Celithe,因为其中性的化学特性，它不与任何物质产生相互效果。

  综上所述，液体上样和固体上样各有好坏、各有所长，可根据样品性质和实验意图来挑选运用，差异化的操作来得到方针纯化合物。

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